大鼠 ELISA 試劑盒是一種用于檢測(cè)大鼠體內(nèi)特定蛋白質(zhì)、抗原或抗體的實(shí)驗(yàn)工具，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域。以下是關(guān)于大鼠 ELISA 試劑盒的詳細(xì)說(shuō)明：
檢測(cè)原理：以雙抗體夾心 ELISA 法為例，用抗大鼠目標(biāo)分子的抗體包被于酶標(biāo)板上，樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的目標(biāo)分子與包被抗體結(jié)合，游離成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠目標(biāo)分子抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素，形成免疫復(fù)合物，再次洗去游離成分。加入顯色底物（TMB），TMB 在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè) OD 值，目標(biāo)分子濃度與 OD450 值之間呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品中目標(biāo)分子的濃度。
試劑盒組成：以 96 孔配置的大鼠單胺氧化酶 A（MAOA）ELISA 試劑盒為例，通常包括 96 孔酶標(biāo)板、塑料膜板蓋、標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液、生物素標(biāo)記的抗體、酶標(biāo)記物、洗滌緩沖液、底物 A、底物 B、終止液、標(biāo)本稀釋液等。
規(guī)格與保存：常見(jiàn)規(guī)格有 96T 和 48T。保存溫度一般為 2-8℃，有效期通常為 6 個(gè)月。
樣本要求：可檢測(cè)的樣品形式包括血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、相關(guān)生物液體等。樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。如血清需使用不含熱原的試管，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞分離；血漿可用 EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清等。
操作步驟：
準(zhǔn)備工作：試劑盒從冰箱取出后，需在室溫平衡 20 分鐘。
加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；樣本孔加待測(cè)樣本 50μL，若樣本需要稀釋?zhuān)燃哟郎y(cè)樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL，空白孔不加。
溫育：除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
洗板：手工洗板時(shí)，甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次；自動(dòng)洗板機(jī)則每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
顯色：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
終止：每孔加入終止液 50μL。
測(cè)定：15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。
計(jì)算：在 Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng) OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)，按曲線(xiàn)方程計(jì)算各樣本濃度值。
注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
濃度為 0 的 S0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；若樣本已經(jīng)稀釋?zhuān)Y(jié)果需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)才是樣本實(shí)際濃度。
嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

所有液體組分使用前充分搖勻。

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